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如何進行耐藥細胞株篩選工作
點擊次數：233 發布時間：2023-02-15
耐藥細胞株是從細胞系中篩選出來的具有特殊性質的細胞。一些特定細胞株已經被商用，廣泛用于各種細胞實驗中。這一過程，不同的企業平臺也可以采用許多不同的策略來優化其工作流程，而其中的篩選過程直接決定了細胞形成單克隆細胞株的水平，因而顯得尤為重要。
方法一：先把質粒整合到染色體上后，用相應的質粒DNA中的抗性標志來篩選該細胞系，單克隆篩選穩定細胞株。
第一步：篩選濃度測定，以10~14天細胞全部死亡的抗生素濃度為篩選濃度；
第二步：進行細胞接種，轉染實驗前天接種細胞，各種細胞的平板密度依據各種細胞的生長率和細胞形狀而定。進行轉染當天細胞密度應達到60%~80%覆蓋；
第三步：進行細胞轉染
第四步：利用質粒上含有的抗性選擇進行篩選，并鑒定篩選結果。
方法二：應用逆轉錄病毒，慢病毒轉染，篩選穩定細胞株。慢病毒可以攜帶外源基因隨機整合進基因組。轉染得到穩定細胞株的效率高，是建立穩定株的方式。
第一步：將人源化的抗體基因轉接到慢病毒載體上，
第二步：使用包裝細胞，一般為293細胞，包裝出病毒，不同類型病毒包裝時間一般在3-5天。
第三步：用病毒轉染目的細胞。包裝好的病毒要先測滴度，根據滴度決定轉染目的細胞的病毒量。
第四步：后期篩選。轉染目的細胞1-2天后加抗生素篩選得到穩定細胞株。
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